對(duì)蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（蒸發(fā)光散射檢測(cè)器）校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)樣品蔗糖 – 甲醇溶液和對(duì)乙酰氨基酚 – 甲醇溶液進(jìn)行了研究。

實(shí)驗(yàn)表明，用蔗糖 – 甲醇溶液和對(duì)乙酰氨基酚 – 甲醇溶液校準(zhǔn)具有 蒸發(fā)光散射檢測(cè)器 的高效液相色譜儀，其保留時(shí)間、峰面積、最低檢測(cè)濃度 3 個(gè)參數(shù)均符合檢定校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)要求。但蔗糖 – 甲醇溶液色譜峰的對(duì)稱性差且響應(yīng)值明顯低于對(duì)乙酰氨基酚 – 甲醇溶液，因此用后者作為 ELSD 檢校用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)更適合。

蒸發(fā)光散射檢測(cè)器作為高效液相色譜儀的一個(gè)重要組成部分，其發(fā)展在某種意義上決定著 HPLC 技術(shù)的進(jìn)步。

靈敏度高、性能穩(wěn)定的通用型檢測(cè)器的缺乏，在一定程度上制約了 HPLC 的應(yīng)用［1］。

液相色譜儀 –蒸發(fā)光散射檢測(cè)器 (ESLD）是 20 世紀(jì) 90 年代開始應(yīng)用的一種新型質(zhì)量檢測(cè)器。

由于 ESLD 無需樣品具有光吸收特性，無需帶有發(fā)色團(tuán)或熒光基團(tuán)，對(duì)高效液相色譜儀現(xiàn)有的傳統(tǒng)檢測(cè)器是一個(gè)很好的補(bǔ)充。

針對(duì)磷脂、糖類、未衍生的脂肪酸和氨基酸物質(zhì)的分析和一些抗生物類的藥物分離效果很好，在我國中藥、食品領(lǐng)域有著廣泛應(yīng)用。

2002 年實(shí)施的國家計(jì)量檢定規(guī)程 JJG 705–2002 《液相色譜儀》沒有列入 ELSD，目前對(duì) ELSD的檢校還處于空白狀態(tài)。

2005 年中國藥典列出了必須使用 ELSD 檢測(cè)的 26 種藥品，如黃芪、銀杏葉片、地膚子、知母、浙貝母、硫酸卡那霉素等［2］。

隨著此類檢測(cè)器越來越被廣泛應(yīng)用,相關(guān)計(jì)量技術(shù)委員會(huì)應(yīng)盡快將其列入規(guī)程規(guī)范的范圍，研究補(bǔ)充現(xiàn)行液相色譜儀檢定規(guī)程的 ELSD 的檢定方法和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，以實(shí)現(xiàn)被檢儀器的有效溯源。

對(duì)ELSD 檢校時(shí)常用標(biāo)準(zhǔn)樣品蔗糖 – 甲醇溶液和對(duì)乙酰氨基酚 – 甲醇溶液進(jìn)行了研究。

實(shí)驗(yàn)部分

ELSD 檢測(cè)原理

ELSD 檢測(cè)原理是首先將柱洗脫液霧化形成氣溶膠，然后在加熱的漂移管中將溶劑蒸發(fā)，最后余下的不揮發(fā)性溶質(zhì)顆粒在光散射檢測(cè)池中得到檢測(cè)。全過程主要包括流動(dòng)相的霧化、流動(dòng)相的蒸發(fā)、對(duì)含有待測(cè)物的剩余顆粒的光散射 3 個(gè)步驟。此類檢測(cè)器有以下特點(diǎn)：信號(hào)響應(yīng)與樣品質(zhì)量相關(guān)，可獲得未知物的質(zhì)量信息；多溶劑梯度可獲得穩(wěn)定的基線，無溶劑峰干擾，受溫度影響小；分離復(fù)雜樣品時(shí)，流動(dòng)相中可適當(dāng)添加改性劑，如乙酸銨、冰乙酸、甲酸、TFA，氨水、三乙胺等。

ELSD 校準(zhǔn)用物質(zhì)的選擇

根據(jù)國內(nèi)外幾家大型公司對(duì) ELSD 的驗(yàn)收方法和所用校準(zhǔn)物質(zhì)的比較分析，選擇蔗糖和對(duì)乙酰氨基酚進(jìn)行研究。

主要儀器與試劑

高效液相色譜儀配ELSD

蔗糖（C12H22O11· H2O）：純度不低于 99.0%

對(duì)乙酰氨基酚（C8H9NO2）：純度不低于 99.0%

甲醇：色譜純

色譜條件

色譜柱：C18 (250 mm×4.6 mm ，5μm)；

流動(dòng)相：甲醇，流速為 1.0 mL／min ；

漂移管溫度：30℃；

氮?dú)鈮毫Γ?.0×105 Pa ；

進(jìn)樣體積：20 μL。

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

分別精確稱取 25 mg 蔗糖和對(duì)乙酰氨基酚于250 mL 容量瓶中，加入甲醇溶解并定容至刻度，混勻，即得質(zhì)量濃度為 1.0×10–4 g／mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別精確稱取 50 μg 蔗糖和對(duì)乙酰氨基酚于500 mL 容量瓶中，加入甲醇溶解并定容至刻度，混勻，即得質(zhì)量濃度為 1.0×10–7 g／mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

結(jié)果與討論

保留時(shí)間和峰面積測(cè)定

在色譜條件下，分別對(duì) 1.0×10–4 g／mL 的蔗糖 – 甲醇溶液和對(duì)乙酰氨基酚 – 甲醇溶液進(jìn)行分析，色譜譜圖見圖 1、圖 2，保留時(shí)間、峰面積及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差見表 1。JJG 705–2002［3］中 3.4 節(jié)整機(jī)性能要求定性測(cè)量重復(fù)性（6 次測(cè)量結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差）不超過 1.5%;定量測(cè)量重復(fù)性（6 次測(cè)量結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差）不超過 3.0%。由表 1 可知，保留時(shí)間、峰面積兩個(gè)參數(shù)均符合檢定校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的要求。

蔗糖 – 甲醇溶液色譜峰的對(duì)稱性不如對(duì)乙酰氨基酚 – 甲醇溶液色譜的對(duì)稱性好。由表1可知，蔗糖–甲醇溶液和對(duì)乙酰氨基酚–甲醇溶液的出峰時(shí)間接近，而蔗糖–甲醇溶液稍早些，蔗糖–甲醇溶液的保留時(shí)間重復(fù)性優(yōu)于對(duì)乙酰氨基酚–甲醇溶液。若參照現(xiàn)行JJG 705–2002《液相色譜儀檢定規(guī)程》，兩者均符合要求，兩種溶液的色譜峰面積重復(fù)性接近，但對(duì)乙酰氨基酚–甲醇溶液的響應(yīng)值比蔗糖–甲醇溶液要高。

最低檢測(cè)濃度的測(cè)定

在1.4色譜條件下，對(duì)1.0×10–7 g／mL的蔗糖–甲醇溶液和對(duì)乙酰氨基酚 – 甲醇溶液進(jìn)行分析，最小檢測(cè)濃度按下式計(jì)算：

                V——進(jìn)樣體積，μL。

標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜測(cè)定數(shù)據(jù)見表 2。根據(jù)表 2 數(shù)據(jù)計(jì)算得蔗糖 – 甲醇溶液最低檢測(cè)濃度為 3.9×10–10g／mL，對(duì)乙酰氨基酚–甲醇溶液的最低檢測(cè)濃度為7.5×10–10 g／mL，符合JJG 705–2002規(guī)定的各檢測(cè)器檢測(cè)濃度不超過1.0×10–9 ～1.0×10–6 g／mL的要求，與目前大多數(shù)ELSD的檢測(cè)限指標(biāo)處在1.0×10^–10～1.0×10^–7 g／mL范圍內(nèi)［4］相一致。

結(jié)論

ELSD 檢測(cè)器是一種通用型檢測(cè)器，檢測(cè)器信號(hào)響應(yīng)與樣品質(zhì)量相關(guān)，可獲得未知物的質(zhì)量信息，是一種質(zhì)量型檢測(cè)器，它消除了高效液相色譜儀其它常見檢測(cè)器的問題。示差檢測(cè)器受溶劑前沿峰的干擾使得分析復(fù)雜化，并且由于對(duì)溫度極其敏感使基線不穩(wěn)定，與梯度洗脫不相容。另外示差檢測(cè)器的響應(yīng)不如 ELSD 靈敏。低波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器在急變梯度條件下受基線漂移的困擾，并要求被分析化合物帶有發(fā)色團(tuán)，而 ELSD 則不受這些限制，未來在食品、藥品領(lǐng)域的應(yīng)用會(huì)越來越廣泛。經(jīng)研究可知，蔗糖 – 甲醇溶液和對(duì)乙酰氨基酚 –甲醇溶液用于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行計(jì)量檢定，其保留時(shí)間、峰面積、最低檢測(cè)濃度這 3 個(gè)參數(shù)均符合檢定校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)要求。但蔗糖 – 甲醇溶液色譜峰的對(duì)稱性差且響應(yīng)值低于對(duì)乙酰氨基酚 – 甲醇溶液，所以后者作為檢校用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)更適合。由于不同廠家儀器的設(shè)計(jì)理念相差很大［5］，對(duì)于所有廠家不同型號(hào)的檢測(cè)器是否適用還需要做大量實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證。

摘自：《化學(xué)分析計(jì)量》